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在腫瘤免疫治療領(lǐng)域，受體酪氨酸激酶樣孤兒受體1（ROR1）近年來備受關(guān)注。作為ROR受體家族的一員，ROR1在胚胎發(fā)育中扮演重要角色，而在正常成人組織中表達(dá)較少或不表達(dá)。然而，研究發(fā)現(xiàn)ROR1在多種惡性腫瘤中異常高表達(dá)，這使其成為腫瘤診斷和治療的新靶點(diǎn)。本文將深入探討ROR1的生物學(xué)特性、與腫瘤的關(guān)系以及其蛋白質(zhì)表達(dá)水平在臨床試驗(yàn)中的應(yīng)用。
PART 01
ROR1的家族與功能：從胚胎發(fā)育到腫瘤發(fā)生
ROR1是一種I型跨膜蛋白，屬于受體酪氨酸激酶樣孤兒受體（ROR）家族。它由937個(gè)氨基酸組成，其胞外部分包含免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域、卷曲蛋白結(jié)構(gòu)域（FZD）和近膜Kringle結(jié)構(gòu)域，F(xiàn)ZD結(jié)構(gòu)域參與Wnt通路信號傳導(dǎo)，Kringle結(jié)構(gòu)域有助于識別Wnt并結(jié)合大分子結(jié)構(gòu)，進(jìn)而驅(qū)動(dòng)胞內(nèi)酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域傳遞細(xì)胞增殖信號[1]。ROR1最初是在1992年通過cDNA文庫篩選發(fā)現(xiàn)的，因其在正常成人組織中表達(dá)受限且缺乏已知配體，被稱為“孤兒受體” [2]。在胚胎發(fā)育過程中，ROR1參與調(diào)控神經(jīng)元遷移、骨骼發(fā)育、心臟形成和細(xì)胞極性的建立。研究表明，ROR1通過激活Wnt5a信號通路調(diào)控細(xì)胞遷移和組織形態(tài)發(fā)生[3]。然而，胚胎發(fā)育完成后，ROR1表達(dá)顯著下調(diào)，僅于部分正常組織中維持低水平表達(dá)。
圖1 ROR1蛋白結(jié)構(gòu)
PART 02
ROR1的表達(dá)特征：從正常組織到腫瘤異常
ROR1在正常成人組織中的表達(dá)具有高度選擇性。根據(jù)人類蛋白質(zhì)圖譜（Human Protein Atlas）和相關(guān)研究數(shù)據(jù)，ROR1在大多數(shù)正常成人組織中表達(dá)水平極低或檢測不到，例如在腦、心臟、肺和肝臟等重要器官中幾乎不存在ROR1的表達(dá)[4]。然而，ROR1在某些特定正常組織中呈現(xiàn)明顯的細(xì)胞表面染色[5,6]。例如，在甲狀旁腺、胰島細(xì)胞以及胃腸道的某些區(qū)域（如食管基底膜、胃竇和十二指腸粘膜）中，可以檢測到ROR1的顯著表達(dá)（圖2A-B）。此外，脂肪組織和某些上皮細(xì)胞中也觀察到低水平的ROR1表達(dá)。
圖2 ROR1在正常組織中的表達(dá)
與正常組織相反，ROR1在多種惡性腫瘤中異常高表達(dá)，包括慢性淋巴細(xì)胞白血病（CLL）、套細(xì)胞淋巴瘤（MCL）、急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）、彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤（DLBCL）等血液系統(tǒng)腫瘤，以及乳腺癌（尤其是三陰性乳腺癌）、肺癌、卵巢癌、結(jié)腸癌和黑色素瘤等實(shí)體腫瘤[7-9]（圖3A-E）。研究表明，ROR1的高表達(dá)與腫瘤侵襲性、轉(zhuǎn)移能力和不良預(yù)后密切相關(guān)[10]。這種在正常組織中低表達(dá)而在腫瘤中異常高表達(dá)的特性，使ROR1成為腫瘤診斷和治療的理想靶點(diǎn)?；赗OR1在腫瘤中的特異性高表達(dá)特性，其臨床轉(zhuǎn)化潛力逐漸顯現(xiàn)，尤其在預(yù)后評估與靶向治療中備受關(guān)注。
圖3 ROR1在腫瘤中的表達(dá)
PART 03
ROR1檢測在臨床試驗(yàn)中的應(yīng)用：從血液腫瘤到實(shí)體瘤
ROR1作為腫瘤特異性靶點(diǎn)，在血液腫瘤和實(shí)體瘤的臨床試驗(yàn)中展現(xiàn)出廣闊的應(yīng)用前景。在多項(xiàng)臨床試驗(yàn)和回顧性研究中，ROR1的高表達(dá)與患者的總生存期（OS）縮短顯著相關(guān)。例如，在彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤（DLBCL）的研究中，通過免疫組化染色檢測ROR1表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)ROR1高表達(dá)的患者OS顯著低于ROR1低表達(dá)或陰性患者[11]。類似的結(jié)果也在非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）和卵巢癌中得到驗(yàn)證，ROR1高表達(dá)與腫瘤的侵襲性、轉(zhuǎn)移潛能及不良預(yù)后密切相關(guān)[12,13]。
這些研究結(jié)果表明，ROR1 IHC檢測不僅能夠?yàn)榕R床試驗(yàn)提供可靠的入組標(biāo)準(zhǔn)，還能夠預(yù)測患者的OS和治療反應(yīng)，為個(gè)體化治療方案的制定提供重要依據(jù)。
圖4 ROR1 的高表達(dá)與肺腺癌患者的較短OS相關(guān)
PART 04
ROR1檢測：判讀方法與標(biāo)準(zhǔn)化
目前，常用的ROR1判讀方法為H-score（組織化學(xué)評分）[8,9]。H-score是一種用于半定量評估免疫組化染色結(jié)果的方法，特別在腫瘤學(xué)研究中被廣泛采用，它綜合考慮了陽性細(xì)胞比例和著色強(qiáng)度，其計(jì)算公式為：H-score = (弱陽性腫瘤細(xì)胞比例 × 1) + (中等陽性腫瘤細(xì)胞比例 × 2) + (強(qiáng)陽性腫瘤細(xì)胞比例 × 3)，總分范圍為0-300。
圖5 多腫瘤TMA隊(duì)列中的ROR1表達(dá)和H-score值
ROR1的免疫組化（IHC）染色在臨床診斷和研究中具有重要意義，其染色特點(diǎn)主要表現(xiàn)為細(xì)胞膜和/或細(xì)胞質(zhì)的特異性著色。ROR1的陽性表達(dá)通常呈現(xiàn)為清晰的膜染色，有時(shí)伴有細(xì)胞質(zhì)染色，但單純的細(xì)胞質(zhì)染色需謹(jǐn)慎判讀，以避免假陽性結(jié)果。在判讀過程中，正常組織（如脂肪組織或胰腺）可作為內(nèi)對照，確保染色質(zhì)量。不同抗體的染色結(jié)果可能存在差異，建議使用經(jīng)過嚴(yán)格驗(yàn)證的商業(yè)化抗體。熙寧生物已經(jīng)利用相關(guān)抗體建立起ROR1的免疫組化檢測方法，歡迎廣大客戶垂詢。
正常胰腺組織 | 胰腺癌 |
非小細(xì)胞肺癌 | 套細(xì)胞淋巴瘤 |
圖6 ROR1染色示意圖（來自上海精翰生物IHC實(shí)驗(yàn)室）
PART 05
關(guān)于我們
熙寧生物|精翰生物的組織病理平臺(tái)，在生物醫(yī)藥研發(fā)與臨床應(yīng)用的關(guān)鍵環(huán)節(jié)中，發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。無論是在臨床試驗(yàn)階段，為藥物療效評估提供關(guān)鍵依據(jù)；還是在伴隨診斷試劑盒前期開發(fā)，助力精準(zhǔn)醫(yī)療的前沿探索；亦或是在動(dòng)物病理研究，為基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)提供扎實(shí)的數(shù)據(jù)支撐，熙寧生物的生物病理平臺(tái)都能憑借其專業(yè)能力，提供全方位、高質(zhì)量的病理支持服務(wù)。
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平臺(tái)已成功完成超200種靶標(biāo)的免疫組化方法開發(fā)，其中包括PD-L1、Claudin18.2、HER2、HER3、TROP-2、dMMR、TIM-3、MSLN、B7H3等備受關(guān)注的關(guān)鍵靶標(biāo)，且多種方法已獲得NordiQC、CAP、CCPI等國內(nèi)外權(quán)威機(jī)構(gòu)的高度認(rèn)可。憑借卓越的服務(wù)品質(zhì)和專業(yè)能力，熙寧生物生物病理平臺(tái)已與100多家客戶建立了長期穩(wěn)定的合作關(guān)系，深度參與了超過200個(gè)涵蓋臨床前、臨床1-3期的各類病理檢測項(xiàng)目，在行業(yè)內(nèi)樹立了良好的口碑和卓越的品牌形象。
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